នៅក្នុងដំណើរការនៃការសិក្សាហ្សែន យើងតែងតែជួបប្រទះគំរូ RNA មិនគ្រប់គ្រាន់ ឧទាហរណ៍សម្រាប់ការសិក្សាដុំសាច់ក្នុងមាត់តូចៗ សូម្បីតែគំរូកោសិកាតែមួយ និងគំរូនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនជាក់លាក់ដែលត្រូវបានចម្លងនៅកម្រិតទាបបំផុតនៅក្នុងកោសិការបស់មនុស្ស។ជាការពិតណាស់ សម្រាប់ការធ្វើតេស្តរកមេរោគកូវីដ-១៩ ប្រសិនបើ swabs មិននៅនឹងកន្លែងត្រឹមត្រូវ ឬមិនមានពេលវេលាគ្រប់គ្រាន់អំឡុងពេលយកគំរូនោះ ទំហំគំរូនឹងទាបខ្លាំង ដែលជាហេតុនាំឱ្យគណៈកម្មការសុខភាព និងផែនការគ្រួសារបានចេញកាលពីពីរថ្ងៃមុន និង បានឆ្លងកាត់ការធ្វើតេស្ត ហើយប្រសិនបើសំណាកអាស៊ីត nucleic មិនយកគំរូចំនួនប្រាំមួយ អ្នកអាចរាយការណ៍វាបាន។
ភាពរសើបនៃសារធាតុប្រតិកម្មគឺសំខាន់ ដោយសារយើងមានបញ្ហានេះ ឬបញ្ហានោះ ដូច្នេះតើយើងអាចធ្វើដូចម្តេចដើម្បីកែលម្អភាពប្រែប្រួលនៃ RT-PCR?
មុននឹងយើងពិភាក្សាអំពីដំណោះស្រាយដែលអាចកើតមាន សូមនិយាយអំពីផលវិបាកធំពីរជាមួយនឹងស្ថានភាពដែលយើងទើបតែបានលើកឡើង។
ជាដំបូង យើងព្រួយបារម្ភអំពីការបាត់បង់ RNA នៅពេលដែលយើងមានកោសិកាមួយចំនួននៅក្នុងគំរូរបស់យើង។ប្រសិនបើវិធីសាស្ត្របំបែក និងសម្អាតបែបប្រពៃណីត្រូវបានប្រើ ដូចជាវិធីសាស្ត្រជួរឈរ ឬវិធីសាស្ត្រទឹកភ្លៀងអាស៊ីត nucleic នោះ វាមានលទ្ធភាពខ្ពស់ដែលគំរូមួយចំនួននឹងត្រូវបាត់បង់។ដំណោះស្រាយមួយគឺត្រូវបន្ថែមម៉ូលេគុលក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនដូចជា tRNA ប៉ុន្តែទោះបីជាពេលនោះក៏ដោយ ក៏មិនមានការធានាថាការពិសោធន៍ការស្ដារឡើងវិញរបស់យើងមិនអីដែរ។
ដូច្នេះ តើមានវិធីណាល្អជាង?ជម្រើសដ៏ល្អសម្រាប់កោសិកាវប្បធម៌ ឬសំណាកមីក្រូកាយវិភាគវិទ្យាគឺត្រូវប្រើលីហ្សីសដោយផ្ទាល់។
គំនិតនេះគឺដើម្បីបំបែកកោសិការយៈពេល 5 នាទី បញ្ចេញ RNA ទៅក្នុងដំណោះស្រាយ បន្ទាប់មកបញ្ឈប់ប្រតិកម្មរយៈពេល 2 នាទី បន្ទាប់មកបន្ថែម lysate ដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងប្រតិកម្មបញ្ច្រាស់ដើម្បីកុំឱ្យ RNA បាត់បង់ ហើយចុងក្រោយដាក់ cDNA លទ្ធផលដោយផ្ទាល់។ ចូលទៅក្នុងប្រតិកម្មពេលវេលាពិត។
ប៉ុន្តែចុះយ៉ាងណាវិញ ប្រសិនបើដោយសារចំណុចចាប់ផ្តើមមានកំណត់ ឬចំនួនតិចតួចនៃការបញ្ចេញហ្សែនគោលដៅ យើងអាចកែច្នៃ RNA ទាំងអស់ឡើងវិញបាន ហើយនៅតែមិនផ្តល់គំរូគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីទទួលបានសញ្ញាពេលវេលាជាក់ស្តែងល្អ?
ក្នុងករណីនេះ ជំហានមុនការពង្រីកអាចមានប្រយោជន៍ខ្លាំងណាស់។
ខាងក្រោមនេះគឺជាគ្រោងការណ៍ដើម្បីបង្កើនភាពប្រែប្រួលបន្ទាប់ពីការចម្លងបញ្ច្រាស។មុននឹងចាប់ផ្តើម យើងត្រូវសួរនៅខាងក្រោមថាតើគោលដៅណាដែលយើងចាប់អារម្មណ៍ ដើម្បីរចនាបឋមជាក់លាក់សម្រាប់គោលដៅទាំងនេះសម្រាប់ការពង្រីកជាមុន។
នេះអាចសម្រេចបានដោយការបង្កើត primer ចម្រុះដែលមាន primers រហូតដល់ទៅ 100 គូ និងវដ្តប្រតិកម្មពី 10 ទៅ 14 ដង។ដូច្នេះ Master Mix ដែលត្រូវបានរចនាឡើងជាពិសេសសម្រាប់តម្រូវការនេះគឺត្រូវការដើម្បីពង្រីក cDNA ដែលទទួលបានជាមុន។
ហេតុផលសម្រាប់កំណត់ចំនួនវដ្តរវាង 10 និង 14 គឺថាចំនួនវដ្តមានកំណត់នេះធានានូវភាពចៃដន្យរវាងគោលដៅផ្សេងៗ ដែលមានសារៈសំខាន់សម្រាប់អ្នកស្រាវជ្រាវដែលត្រូវការព័ត៌មានម៉ូលេគុលបរិមាណ។
បន្ទាប់ពីការពង្រីកជាមុន យើងអាចទទួលបានបរិមាណដ៏ច្រើននៃ cDNA ដូច្នេះភាពរសើបនៃការរកឃើញនៅផ្នែកខាងក្រោយត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំង ហើយយើងថែមទាំងអាចបន្ថយគំរូ និងធ្វើប្រតិកម្ម PCR ក្នុងពេលជាក់ស្តែងជាច្រើន ដើម្បីលុបបំបាត់កំហុសចៃដន្យដែលអាចកើតមាន។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ មេសា-១១-២០២៣